Youn nan avantaj prensipal kilti selil yo se kapasite nan manipile chimi fizik repwodiksyon selil (sa vle di tanperati, pH, presyon osmotik, tansyon O2 ak CO2) ak anviwònman fizyolojik (sa vle di konsantrasyon òmòn ak eleman nitritif).Anplis de tanperati, anviwònman kilti a kontwole pa mwayen kwasans lan.
Malgre ke anviwònman fizyolojik kilti a pa klè tankou anviwònman fizik ak chimik li yo, yon pi bon konpreyansyon sou konpozan serom, idantifikasyon faktè kwasans ki nesesè pou pwopagasyon, ak yon pi bon konpreyansyon sou mikroanviwònman selil nan kilti.(Sa vle di entèraksyon selil-selil, difizyon gaz, entèraksyon ak matris la) kounye a pèmèt sèten liy selil yo kiltive nan medya san serom.
1.Anviwònman kilti afekte kwasans selil
Tanpri sonje kondisyon kilti selil yo diferan pou chak kalite selil.
Konsekans yo nan devye nan kondisyon yo kilti ki nesesè pou yon kalite selil patikilye varye soti nan ekspresyon an nan fenotip nòmal nan echèk la konplè nan kilti selil.Se poutèt sa, nou rekòmande pou ou vin abitye ak liy selil ou enterese nan epi swiv entèdi enstriksyon yo bay pou chak pwodwi ou itilize nan eksperyans ou.
2.Prekosyon pou kreye yon anviwònman kilti selil optimize pou selil ou yo:
Medya kilti ak serom (gade anba a pou plis enfòmasyon)
Nivo pH ak CO2 (gade pi ba a pou plis enfòmasyon)
Kiltive plastik (gade anba a pou plis enfòmasyon)
Tanperati (gade anba a pou plis enfòmasyon)
2.1 Medya Kiltirèl ak Serom
Mwayen kilti a se pati ki pi enpòtan nan anviwònman kilti a, paske li bay eleman nitritif, faktè kwasans ak òmòn ki nesesè pou kwasans selil, epi li kontwole pH ak presyon osmotik kilti a.
Malgre ke eksperyans inisyal kilti selil yo te fèt lè l sèvi avèk medya natirèl yo te jwenn nan ekstrè tisi ak likid kò, bezwen an pou normalisation, bon jan kalite medya, ak demann ogmante te mennen nan devlopman nan medya definitif.Twa kalite debaz medya yo se medya fondamantal, medya serom redwi ak medya san serom, epi yo gen diferan kondisyon pou sipleman serom.
2.1.1 Mwayen debaz
Mwayen kilti selil Gibco
Pifò liy selil yo grandi byen nan medya debaz ki gen asid amine, vitamin, sèl inòganik, ak sous kabòn (tankou glikoz), men fòmilasyon medya debaz sa yo dwe konplete ak serom.
2.1.2 Mwayen serom redwi
Boutèy ak Gibco Low Serum Medium
Yon lòt estrateji pou diminye efè negatif nan serom nan eksperyans kilti selil yo se sèvi ak medya ki redwi serom.Mwayen serom redwi se yon fòmil mwayen debaz rich nan eleman nitritif ak faktè ki sòti nan bèt, ki ka diminye kantite serom ki nesesè yo.
2.1.3 Mwayen san serom
Boutèy ak mwayen Gibco san serom
Mwayen san serom (SFM) kontourne itilizasyon serom bèt lè li ranplase serom ak fòmilasyon nitrisyon ak òmòn ki apwopriye yo.Anpil kilti prensipal ak liy selil yo gen fòmilasyon medyòm san serom, ki gen ladan Chinwa Hamster Ovary (CHO) liy pwodiksyon pwoteyin recombinant, divès liy selil ibridòm, liy ensèk Sf9 ak Sf21 (Spodoptera frugiperda), osi byen ke pou Lame a pou pwodiksyon viris. (pa egzanp, 293, VERO, MDCK, MDBK), elatriye. Youn nan avantaj prensipal yo nan sèvi ak yon mwayen san serom se kapasite nan fè mwayen an selektif pou kalite selil espesifik lè w chwazi yon konbinezon apwopriye nan faktè kwasans.Tablo ki anba la a bay lis avantaj ak dezavantaj medya san serom.
Avantaj
Ogmante klè
Pèfòmans ki pi konsistan
Pi fasil pou pirifye ak pwosesis en
Evalye ak presizyon fonksyon selilè
Ogmante pwodiktivite
Pi bon kontwòl nan reyaksyon fizyolojik
Deteksyon medya selilè amelyore
Dezavantaj
Kalite selil espesifik fòmil kondisyon mwayen yo
Bezwen pi wo pite reyaktif
Ralentissement nan kwasans
2.2.1 nivo pH
Pifò liy selil nòmal mamifè grandi byen nan pH 7.4, ak diferans ki genyen ant liy selil diferan yo piti.Sepandan, kèk liy selil transfòme yo te montre yo grandi pi byen nan yon anviwònman yon ti kras asid (pH 7.0 - 7.4), pandan ke kèk liy selil nòmal fibroblast prefere yon anviwònman yon ti kras alkalin (pH 7.4 - 7.7).Liy selil ensèk tankou Sf9 ak Sf21 grandi pi byen nan pH 6.2.
2.2.2 nivo CO2
Mwayen kwasans lan kontwole pH kilti a ak tanpon selil yo nan kilti a pou reziste chanjman nan pH.Anjeneral, tanpon sa a reyalize lè yo gen tanpon òganik (pa egzanp, HEPES) oswa CO2-bikabonat ki baze sou.Paske pH mwayen an depann de balans delika nan diyoksid kabòn ki fonn (CO2) ak bikabonat (HCO3-), chanjman nan CO2 atmosferik pral chanje pH mwayen an.Se poutèt sa, lè w ap itilize yon tanpon mwayen ak yon tanpon CO2 ki baze sou bikabonat, li nesesè pou itilize CO2 ekzojèn, espesyalman lè kiltive selil nan asyèt kilti louvri oswa kiltive liy selil transfòme nan konsantrasyon segondè.Malgre ke pifò chèchè anjeneral itilize 5-7% CO2 nan lè a, pifò eksperyans kilti selil anjeneral itilize 4-10% CO2.Sepandan, chak mwayen gen yon tansyon CO2 rekòmande ak konsantrasyon bikabonat pou reyalize pH ki kòrèk la ak presyon osmotik;pou plis enfòmasyon, tanpri al gade enstriksyon manifakti mwayen an.
2.3 Kiltive plastik
Plastik kilti selil yo disponib nan yon varyete fòm, gwosè ak sifas pou adapte divès aplikasyon pou kilti selil.Sèvi ak gid sifas plastik kilti selil ak gid veso kilti selil ki anba a pou ede w chwazi bon plastik pou aplikasyon kilti selil ou a.
Gade tout plastik kilti selil Thermo Scientific Nunc (lyen piblisite)
2.4 Tanperati
Tanperati a pi bon pou kilti selil depann nan yon gwo limit sou tanperati kò a nan lame a ki soti nan ki selil yo izole, ak nan yon pi piti mezi sou chanjman anatomik nan tanperati (pa egzanp, tanperati po a ka pi ba pase sa ki nan misk skelèt. ).Pou kilti selil, Surchof se yon pwoblèm ki pi grav pase surchof.Se poutèt sa, tanperati a nan enkibatè a anjeneral mete yon ti kras pi ba pase tanperati a pi gwo.
2.4.1 Tanperati pi bon pou plizyè liy selilè
Pifò liy selil imen ak mamifè yo kenbe nan 36 ° C a 37 ° C pou kwasans optimal.
Selil ensèk yo kiltive nan 27 ° C pou kwasans optimal;yo grandi pi dousman nan pi ba tanperati ak tanperati ant 27 ° C ak 30 ° C.Pi wo pase 30 ° C, vitalite selil ensèk yo diminye, menm si li retounen nan 27 ° C, selil yo pa pral refè.
Liy selil avyè yo bezwen 38.5 ° C pou yo rive nan kwasans maksimòm.Malgre ke selil sa yo ka kenbe nan 37 ° C, yo pral grandi pi dousman.
Liy selilè ki sòti nan bèt ki gen san frèt (tankou anfibyen, pwason dlo frèt) ka tolere yon seri tanperati laj de 15 ° C a 26 ° C.
Lè poste: Feb-01-2023